非酒精性脂肪肝的确诊主要依赖于“肝活检”作为金标准，但因其有创、依从性差、存在一定并发症而受到限制，因此无创诊断尤其是鉴别出NASH和相关肝纤维化是一个重点话题。包括超声、CT、MRS及受控衰减参数在内的多种方法可以无创评估肝脏脂肪含量，但无法诊断是否存在NASH。

非酒精性脂肪肝在传统上主要依靠肥胖程度、血清AST/ALT比值、IR及高血压等来判定，而新发现的血清细胞角蛋白-18片段成为目前预测成人及儿童NASH的最精确的生化标记物。Joumal of Hepatology杂志曾经介绍了一种新的方法，通过测定呼吸中的挥发性有机物(volatile organic compounds，VOC)成分来判定NASH。VOC为多种氧化反应的产物，如多不饱和脂肪酸的过氧化。通过对肝活检确诊的NASH患者呼吸气体进行气体色谱分析，发现n-tridecane、3 -methyl-butanon_itrile及l-propanol物质与NASH显著相关，其鉴定NASH精确度为0.77，阴性预测值和阳性预测值分别为82%及81%。

另外发现一些蛋白因子可以预测NAFLD发病。成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor 21，FGF21)是一种主要由肝脏分泌的激素，一项为期3年的队列研究发现FGF21是预测非酒精性脂肪肝发病及严重程度的可靠指标。细胞周期蛋白P21的高表达与IR和2型糖尿病有关，对肝组织进行免疫组织化学分析发现其也可能预测非酒精性脂肪肝的发生。